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Plasmid extraction | 質體介紹 2020/06/03

Plasmid extraction | 質體介紹

 

質體(Plasmid)是獨立於宿主染色體DNA的環狀DNA片段,它們主要存在於細菌中,也自然存在於古細菌和真核生物中,例如酵母菌或是植物,質體向宿主提供一種或是多種功能,有益於宿主,例如對於抗生素的抗性,降解功能或是些許毒性。

 

(Addgene)

 

所有天然的質體均包含複製起點(Origin of Replication)(控制質體宿主範圍及拷貝數Copy Number),以及有利於存活的基因如抗生素抗性基因(Resistant gene),實驗室使用的質體通常是人工產生,將外源DNA導入細菌當中產生,人工質體具有複製起點(Ori)、選擇標記物(如螢光基因、抗性基因)及克隆位點(Cloning Site),科學家利用這些特性,修飾質體自我複製的能力,使質體成為生命科學不可或缺的工具之一。

 

Table 1 質體包含DNA片段內容

質體內容

於質體內用途

Origin of Replication (ORI)

DNA序列藉著啟動轉錄蛋白,啟動質體的複製

Antibiotic Resistance Gene

可藉由抗生素基因篩選具有抗性基因的質體

Multiple Cloning Site (MCS)

短片段DNA包含多個限制酶位點,可插入DNA(insert Gene),於表達質體中,MCS通常位於啟動子下游

Insert

目標基因、啟動子或是其它DNA片段被克隆至MCS中進行進一步研究

Promoter Region

驅動目標基因的轉錄,表達載體的重要組成成分,確認基因於不同細胞類型中表達以及可獲得重組蛋白的量

Selectable Marker

抗生素抗性基因於細菌中進行選擇,許多質體也具有用於其它細胞類型的抗性基因選擇標記

Primer Binding Site

短鏈單股DNA序列,用於PCR擴增或測定序起始點,飲物可用於質體的序列驗證

 

Table 2 質體複製起點及拷貝數

 

DNA construct(Plasmids)

複製起點(Origin of Replication)

拷貝數(Copy number)

分類

pUC vectors

pMB1*

500–700

high copy

pBluescript® vectors

ColE1

300–500

high copy

pGEM® vectors

pMB1*

300–400

high copy

pTZ vectors

pMB1*

>1000

high copy

pBR322 and derivatives

pMB1*

15–20

low copy

pACYC and derivatives

p15A

10–12

low copy

pSC101 and derivatives

pSC101

~5

very low copy

         

 

Table 3 抗生素使用條件及儲存建議

 

抗生素

建議儲存濃度

建議使用濃度

Ampicillin

100 mg/mL

100 µg/mL

Carbenicillin

100 mg/mL

100 µg/mL

Chloramphenicol

25 mg/mL(dissolve in EtOH)

25 µg/mL

Hygromycin B

200 mg/mL

200 µg/mL

Kanamycin

50 mg/mL

50 µg/mL

Spectinomycin

50 mg/mL

50 µg/mL

Tetracycline

10 mg/mL

10 µg/mL

 

上述三個表格分別為質體內容,以及不同的複製起點,因應不同的拷貝數,準備相同質體數量情況下,需要增加細菌製備,表三是細菌以及細胞使用抗生素使用濃度及儲存建議,ACE Biolabs也提供相關抗生素化學藥品

 

ACE Biolabs提供產品及服務

ACE Biolabs提供質體萃取及定性及一系列基因克隆(Gene Cloning)實驗代工服務,歡迎與我們聯絡。

參考連結資訊:

https://www.acebiolab.com/TW/Page/56

https://www.acebiolab.com/TW/news/24

https://www.acebiolab.com/TW/news/26

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