Cell culture | 細胞存活率 2020/04/01

Cell culture | 細胞存活率

細胞存活率試劑CCK8與MTT的比較

 

MTT分析法

MTT分析法利用比色法測量細胞代謝活性,此方法為細胞活力、增殖和細胞毒性的指標,MTT與活細胞粒線體中的琥珀酸脫氫酶作用,產生氧化還原反應Formazan藍紫色結晶,藉由二甲基亞風DMSO有機溶劑將紫色結晶溶解,產生紫色液體,藉由測定吸光值(570nm)評估細胞活性及增殖。

 

MTT assay實驗原理

MTT assay實驗流程

CCK-8分析法

CCK-8材料含有tetrazolium salt-WST-8WST-8被活細胞內的脫氫酶(dehydrogenase)被還原成可溶於培養基中的水溶性橘黃色產物WST-8 formazan,產物與活細胞數量成正比,使用CCK-8實驗步驟簡單,直接加入培養液中,放置一到四小時,即可測量,不需另外將上清液去除以及加入有機溶劑。WST-8 formazan的產量取決於細胞內脫氫酶的活性,可直接反映存活細胞的數量,使用比色法直接測量450nm波長。(下圖為反應式及操作步驟)

 

CCK-8實驗原理

https://www.creative-bioarray.com/images/2-3-2-Comparison-of-Different-Methods-to-Measure-Cell-Viability-4.png

CCK-8實驗流程

 

CCK-8MTT靈敏度比較---實驗案例

以四種細胞株為例,於96孔盤接種同樣數量細胞株以及同樣生長條件下,使用兩者比較,結果顯示橘色線CCK-8吸光值比紫色MTT高,CCK-8於同樣情況下靈敏度較佳,較MTT更容易精確評估細胞存活率以及生長速率,區分組間差異。

 

MTTCCK-8兩者比較

 

MTT

CCK-8

MTT--> Formazan

WST-8-->WST-8 Formazan

步驟繁瑣

時間短操作簡易

細胞不可重複使用

細胞可繼續培養

容易產生實驗誤差
(吸量誤差pipetting error)

實驗變因少

批次易產生誤差

實驗再現性穩定

需配置,效期短

可立即使用,4℃可存放一年

明顯產生紫色結晶

顏色接近培養液,容易忘記添加

毒性高

毒性低

測定波長:550~600nm

測定波長:450~490nm

需要更換培養液

不須更換培養液

使用於貼附細胞

適用貼附及懸浮細胞

不同細胞株數量需要優化

水溶性立即可測吸光值

靈敏度較低

靈敏度高

 

常見問題及解決方案:

  1. 需要準備多少細胞於96-well盤中測試?

Ans: 貼附細胞於CCK-8需要每孔1000顆細胞以上,MTT需要因不同細胞株優化數量以及OD值範圍。

  1. 培養基內酚紅(Phenol red)是否影響OD值範圍?

Ans: CCK-8可經由扣除背景值方式去除,MTT因去除培養基,加入透明DMSO有機溶劑溶解紫色結晶,可以直接測量OD值。

  1. CCK-8MTT對細胞的毒性?

Ans: CCK-8對於細胞毒性低,使用過後,仍可以繼續培養,或是去除培養基使用MTT測試Cell viability佐證。

 

我們的服務及產品

 

我們提供MTT以及CCK-8細胞存活率試驗,以及相關CCK-8(CC1007, CCK-8 Kit)試劑以及MTT (C46602B, MTT)藥品。

 

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