ACE BioLabs 提供三種病毒載體系統,依您的實驗目的選擇最適合的病毒載體系統。

Characteristic

Lentivirus
(
慢病毒)

Adenovirus
(
腺病毒)

AAV
(
腺相關病毒)

infection

Most dividing and non- dividing cells

Most dividing and
non- dividing cells

Most dividing and
non- dividing cells

Integration

Random Integrating

Non- Integrating

Non- Integrating

Expression

Stable

Transient

Transient

Package Capacity

≤5K

≤8K

≤5K

Expression duration

2~4 days

1~2 days

1~2 days

Immunogenicity

Low

High

Low

Tissue targeting

NO

NO

YES

Titer range

1E+8~1E+9 TU/mL

1E+11~1E+12 PFU/mL

1E+11~1E+13 vg/mL

若您不熟悉病毒載體系統,不知如何選擇,請參考 病毒載體基因傳遞簡介 或是與我們的技術部門討論您的實驗目的,由我們為您挑選適合的病毒載體。

慢病毒包裝 Lentivirus Packaging Services

   

 

Lentivirus 慢病毒藉由將基因轉入整合到宿主細胞基因組內的方式,進而穩定表達基因,此項方法已成為基因表達Gene expression、基因沉默Gene silence、基因編輯Gene editing 最強大的生物工具。

 

    ACE Biolabs 慢病毒包裝系統採用 pMD2.G Envelop plasmid 表現 VSV-G 外膜蛋白,使病毒包裝更穩定,並能感染更廣泛細胞類型;psPAX2 Packaging plasmid 表現 gag、pol,減少病毒自我複製的能力,提升使用上的安全性;Transfer plasmid 實驗室備有 pLenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro 、pLenti-His 以及 pLVX-IRES-Puro ,客戶可靈活選用有GFP reporter 、6x His-tag 的vector 進行實驗。

 

    我們提供彈性階段性服務,從載體構建設計,包裝慢病毒、濃縮、測效價、感染目標細胞到確認目標基因表現分析,客戶可從任何階段委託實驗,或進行全面性整合服務,我們都能專案為您服務。

 

-

Lentivirus Package 服務特色

1. 執行單位為P2合格實驗室,具有10年生產經驗。

2. 可以提供高力價(106-108/ml)、高產量( ~8ml) Lentivirus。

3. 使用ACE Biolabs 嚴選高品質試劑,確保每個實驗環節。

4. 確認接案,到客戶收到病毒,僅需2-3周時間。

-

Lentivirus Package 服務流程 

1. 根據目標基因訊息,建構病毒重組載體 。

2. 進行定序確認載體序列正確,並抽取高質量、低內毒素病毒載體。

3. 如客戶自行提供質體,請跑膠確認Quality,並依需求量2/4/8 ml提供10/25/50 μg plasmid,濃度>1μg/μl

4. 共轉染到 HEK293T細胞中進行病毒包裝,收集上清病毒液。

5. 濃縮、純化病毒液。

6. 測試病毒液對於HEK 293T 細胞感染效果。

7. 透過qPCR檢測病毒Titer符合出貨規格106-108/ml。

8. 感染目標細胞,檢測基因表達、基因沉默等現象。

-

Lentivirus Package 品質確效

1. 提取高質量、低內毒素病毒載體進行轉染。

2. 使用低毒性、高轉染效率試劑,增加病毒生產效率。

3. 選用年輕代數的HEK293T 進行包裝,確保細胞健康狀態。

-

慢病毒包裝服務表單下載

腺病毒包裝 Adenovirus Packaging Services

腺病毒(adenovirus)載體,是以腺病毒為原型進行基因功能改造而成的,無外殼的雙鏈DNA病毒,病毒載體轉基因效率高,體外實驗通常接近100%的轉導效率;可轉導不同類型的人組織細胞,不受靶細胞是否為分裂細胞所限;容易制得高滴度病毒載體,在細胞培養物中重組病毒滴度可達1.0E+11PFU/ml;進入細胞內並不整合到宿主細胞基因組,僅瞬間表達,安全性高。

ACE Biolabs 腺病毒包裝系統(E1和E3雙缺失),該系統是將輔助質粒(packaging plasmid) 和穿梭質粒(Transfer plasmid) 共轉染至HEK293細胞,在細胞內過Cre/loxP重組酶系統發生重組,從而獲得目的腺病毒。該系統操作簡便、重組效率高、獲得的病毒產率高(一般大於104vp/cell)、目的基因的表達水準高(因為mCMV啟動子比hCMV啟動子強若干倍)等優點。

 

我們可提供多種載體 : 包含有多種啟動子Promotor (如:Ubi、EF1a)和篩選標記Selection Marker(如:cherry、copGFP)可供選擇。

例如 :

Purpose

Component 

Selection Marker

干擾型 腺病毒載體

hU6-MCS-CMV-Puromycin

Puromycin

干擾型 腺病毒載體

hU6-MCS-CMV-RFP

RFP

干擾型 腺病毒載體

hU6-MCS-CMV-EGFP

EGFP

過表達型
腺病毒載體

CMV-MCS

N/A

過表達型
腺病毒載體

CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP

EGFP

過表達型
腺病毒載體

CMV-MCS-3FLAG-SV40-RFP

RFP

過表達型
腺病毒載體

CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin

EGFPPuromycin

 

Adenovirus Package 服務流程 

腺相關病毒包裝 AAV Packaging Services

腺相關病毒載體

腺相關病毒(AAV)是一種複製缺陷型細小病毒,其增殖複製需要腺病毒或皰疹病毒的輔助。由於其安全性好、宿主細胞範圍廣(分裂和非分裂細胞)、免疫源性低,在體內表達外源基因時間長等特點,這些特點使重組AAV成為用於基因轉移和基因治療的一個非常有吸引力的工具載體。迄今為止,許多臨床試驗使用腺相關病毒載體進行基因治療,包括CFTR,Hemophilia B, Arthritis 和 Parkinson's diseas,臨床I期和II期試驗都獲得理想的結果。AAV病毒具有明顯的組織噬性,如:

AAV1載體:明顯的骨骼肌嗜性(包括心肌),神經組織也可以感染;

AAV2載體:泛嗜性;最早應用的AAV載體。有效轉導肌肉,肝臟,腦組織,對於視網膜的轉導效率和表達水準良好

AAV5載體:視網膜、神經系統、關節滑膜嗜性、肺;

AAV8載體:明顯肝嗜性,視網膜、神經組織也可以感染;

AAV9載體:心肌嗜性,可穿過血腦屏障;

AAV-DJ:廣譜性侵染各種細胞,可做細胞實驗

免疫反應:先存免疫(如AAV2)、反復給藥引起針對AAV的免疫反應。

 

腺相關病毒用於基因傳遞和表達的優勢

1) 宿主細胞範圍廣

腺相關病毒可以感染廣泛的哺乳動物細胞並且以成功應用於人源和非人源蛋白的表達,宿主細胞活躍的分裂不是感染的必要條件,重組腺相關病毒能感染分裂期和非分裂期細胞。

2)  長期的基因表達能力

重組AAV能保存於人類宿主細胞中,保持長期的基因轉錄表達能力,對於終末分化的細胞這個優點特別明顯。

3) 低免疫原性

與已獲得臨床應用的腺病毒載體相比,AAV在注射後引起的免疫反應是微弱並且短暫的。

4) 良好的擴散性能

AAV的病毒粒徑只有腺病毒的1/5,慢病毒的1/4,體積上相差數十倍到100倍,所以AAV的擴散性遠高於這兩種病毒。

5) 較高的生物安全級別

AAV是天然缺陷型病毒(生產性感染依賴於幾個額外的反式因數),並且目前還沒有發現它和任何的人類疾病有關聯。在AAV Helper-Free System中,AAV反向重複(ITR)序列和rep/cap基因分別位於缺少共同序列的單獨的質粒上,以阻止生產出重組野生型病毒。這樣特徵賦予了作為病毒來源的基因傳遞和表達系統的AAV Helper-Free System一個較高的生物安全級別。

病毒包裝及感染示意圖:

 

 

多種血清型可選,包括2, 5, 8, 9以及retro2型(逆標),多種滴度以及體積包裝可選,歡迎諮詢!

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