大腸桿菌蛋白表達系統是最常用的表達系統,是使用最廣泛且最經濟實惠的蛋白表達系統。但是仍然存在著表達量低、蛋白活性低、易形成inclusion body和含有內毒素(Endotoxin)等問題。ACE Biolabs 可提供從基因序列優化到大規模發酵製備等一系列服務。

◆ 基因序列優化,提高蛋白相容性;
◆ 自主研發載體,高效表達高度可溶;
◆ 階段實驗選擇,提供客製化實驗流程;

◆ 多種Competent E. coli strains:
BL21(DE3)、Rosetta(DE3) -用於表達真核細胞蛋白、pLysS - 用於表達具有細胞毒性蛋白、Origami -用於促進表達具有雙硫鍵的蛋白...等。

 

服務內容

序列

項  目

實驗內容

工作日

1

表達鑒定

可溶性檢測

  1. 將質體轉殖到Competent E. coli  後,挑選5個colonies,進行表達測試。以SDS-PAGE確認表達。
  2. 選擇表達最佳的colony,進行37oC與15o可溶性分析測試,2個 IPTG濃度優化。以SDS-PAGE確認可溶性。

7-14

2

表達鑒定與可溶性檢測
+ 1L放大表達純化
交付蛋白樣品>1mg(蛋白純度80~85%),以及詳細的實驗報告。

  1. 表達鑒定與可溶性檢測後確認目標蛋白表達量及可溶性,才可進行放大表達純化。[若目標蛋白為不可溶的inclusion body,  需額外進行refolding 測試。]
  2. 1L菌液培養表達,進行一步親和純化(常用:Ni、MBP、GST)。

20-28

3

放大表達純化

根據上述步驟確認 1 L 菌液的表達純化量,
追加表達純化,以每 L 為單位計算。

7-14

4

提高蛋白純度

進行蛋白純化優化測試,提高純度到90%~95%。

20-28

5

去除融合標籤(Tag)

  1. 使用蛋白酶將重組蛋白融合的標籤序列(His-Tag, MBP protein..等)切除。
  2. 蛋白純化

20-28

去除內毒素

根據蛋白量計算收費

7-14

        

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

服務流程

 

填寫 大腸桿菌蛋白表達服務表單 

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電話 : 03-2870051    

email : order@acebiolab.com

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