穩定細胞株可使目標基因長期且穩定的表達,應用範圍包括大規模蛋白合成、長期藥理學研究、基因治療研究和長期遺傳調控機制研究等。透過轉染方式將外源遺傳物質導入真核細胞並整合到細胞的基因組中,外源基因成為細胞基因組的一部分,隨著細胞分裂傳給下一代細胞,達成穩定細胞株的建構。

 

ACE Biolabs建立穩定表現細胞株是透過慢病毒轉染技術,協助無法操作病毒的實驗室建立穩定表現細胞株。我們的團隊擁有專業的慢病毒包裝技術以及背景知識,且有多種慢病毒載體。可依據您的實驗目的以及細胞株特性,測試轉染條件、抗生素篩選條件、能否單株化等,為您提供全方位的穩定細胞株建構服務。

 

服務流程

流程

項目

內容

接案

  1. 了解客戶需求
  2. 簽訂服務委託書
  3. 預付40%訂金與材料費
  1. 了解細胞株特性評估建構穩定細胞株所需時程
  2. 選擇轉染質體

材料準備

細胞培養條件確認

(3- 5 週)

  1. 檢測細胞黴漿菌汙染
  2. 檢測能否形成single colony (optional)
  3. 檢測抗生素篩選條件
  4. 特異細胞株轉染條件確認。無參考資料,需測試轉染條件。

建構表現載體

(3- 5 週)

  1. 基因序列合成或sub-cloning。
  2. 建構表現載體,DNA定序確認。
  3. 大量純化表現載體。

慢病毒包裝

以293T細胞建構慢病毒

  1. 以293T細胞建構慢病毒
  2. 確認慢病毒效價達到MOI  5x106/ml。

轉染表現載體到指定細胞株

感染指定細胞株
(依細胞株特性而定)

  1. 慢病毒轉染指定細胞株 (MOI=5-10)
  2. 依細胞株特性轉染1-2次

建立穩定細胞株

抗生素篩選目標基因穩定表達細胞群 (Stable pool)

(依細胞株生長速率而定)

  1. 抗生素篩選 5-7 天
  2. 收集穩定細胞群以及原始細胞株,以RT-qPCR, Western Blot*或 ELISA*方法確認目標基因表達。

篩選單一穩定細胞株**
(Optional)

 

上述細胞株經稀釋後篩選single clone
(依細胞株生長速率而定)

 

  1. 稀釋穩定表達細胞群篩選single clone
  2. 收集單一穩定細胞株(至少五株細胞),以RT-qPCR, Western Blot*或 ELISA*方法確認目標基因表達。
  3. 提供五株單一穩定細胞株之目標基因表達分析結果,由客戶選擇出貨細胞株。

出貨前檢測

將穩定細胞株培養至出貨規格:

  1. 檢測黴漿菌
  2. 檢測其目標基因表達。
  3. 凍存細胞株

 (1-2週)

  1. 檢測細胞黴漿菌
  2. 收集出貨細胞株,以RT-qPCR, Western Blot*或 ELISA*方法確認目標基因表達。隨貨提供分析結果。
  3. 細胞凍存 : 2x106 cell/tube

細胞培養至出貨規格

Stable cell pool (2x106 cell/tube) 凍管乙管

Stable cell line (2x106 cell/tube) 凍管乙管
(增加凍管或細胞株數目,需額外收費)

 隨貨提供

  1. 該穩定細胞株之目標基因表達分析結果。
  2. 該穩定細胞株之黴漿菌檢測結果

客戶使用檢測

請於一個月內測試細胞,並告知測試結果

  1. 專案建構之慢病毒留存6個月
  2. 細胞凍管留存6個月

*由客戶提供抗體或ACE Biolabs代購抗體

**目標細胞株須經由預先評估確認可形成single colony,才可選擇進行單一化篩選實驗。

 

案件委託服務單: Stable Cell Line 委託服務單

 

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