Virus For DNA Delivery | 病毒載體基因傳遞簡介 2020/04/22

Virus For DNA Delivery | 病毒載體基因傳遞簡介

 

病毒載體有些可將DNA 序列帶入宿主的染色體上(例如反轉錄病毒載體,腺相關病毒載體),有些則存在染色體外(例如腺病毒載體)。每種病毒載體都有其優、缺點。但一個理想的病毒載體必須具備以下一些基本條件:

(1) 有效及容易製備;

(2) 安全,無強烈的副作用;

(3) 可長期,有調控性的表現基因;

(4) 可準確地傳送基因至指定的標的細胞;

(5) 具有感染分裂及不分裂細胞的能力;

(6) 可準確地插在特定的染色體位置上。

當然這是理想中最好的病毒載體,然現今所用之病毒載體尚未有哪一個具備如此好的條件,也是病毒學家目前正在努力的方向。以下介紹目前ACE Biolabs提供的幾種病毒載體技術服務。

 

Lentivirus

 

慢病毒是逆轉錄病毒家族的其中之一,慢病毒可以提供大量重要的遺傳訊息進入宿主細胞,並將其整合到細胞基因組中;因此,慢病毒被用作最有效的基因傳遞工具之一。慢病毒包含病毒啟動子,用於控制轉殖基因或shRNA的表達。經由安全性的修改,使其可以在實驗室中安全使用。

慢病毒如何作用於基因傳遞?

將包裝質粒和轉移載體共轉染至細胞中,可以有效生產釋放到細胞上清液中的慢病毒顆粒。從細胞上清液中收穫的病毒顆粒(Viral particle),可以轉導多種分裂和非分裂哺乳動物細胞類型,利用慢病毒顆粒感染細胞後,單股RNA

(ssRNA)被逆轉錄,生成雙鏈DNA(dsDNA)穩定整合到宿主的基因組中,提供基因或shRNA的長期轉錄。

 

(慢病毒顆粒製備)

使用慢病毒的優勢:

無需轉染試劑

宿主基因穩定整合(與腺病毒相反),可長期表達基因

有效轉導(Transduction)大多數哺乳動物細胞系,包括原代或幹細胞

整合到非分裂細胞(Non-dividing cells)中;與逆轉錄病毒不同,慢病毒不需要有絲分裂過程整合入宿主細胞基因組

較易感染“難以轉染”的細胞系

體內使用時產生免疫排斥低

 

 

Adenovirus

 

腺病毒是雙鏈DNA病毒,可以感染廣泛的細胞類型,包括分裂細胞和非分裂細胞,因此,它們是用於基因傳遞的廣泛使用的載體。 我們的

腺病毒表達載體衍生自人類腺病毒,刪除了E1和E3基因組區域的type5。 由於E1是腺病毒對病毒顆粒的組裝至關重要,修改後的系統僅產生無復制能力的腺病毒。腺病毒可用於轉染多種細胞,包括原代細胞和幹細胞以及動物模型,例如猴子、小鼠和人類細胞。 腺病毒轉染效率通常很高,甚至可以達到90%以上。

 

使用腺病毒的優勢

使用腺病毒很容易獲得很高力價的病毒,腺病毒可以在HEK293細胞中輕鬆擴增產生病毒顆粒。每個哺乳動物細胞平均可產生10,000顆腺病毒。

腺病毒載體複製安全性高

腺病毒通常在人體中發現。由於E1和E3區域已被刪除,使重組腺病毒無法

在人體中複製,可作為安全重組DNA材料。

在哺乳動物細胞中瞬時表達

與慢病毒不同,腺病毒不會插入宿主基因組中,使其他基因失活並激活癌化基因。重組腺病毒在宿主細胞中保有原染色體,使其成為體內研究的理想選擇,

像是人類基因療法及相關基因表現反應。

腺病毒對宿主細胞無毒性

宿主細胞感染後的存活率幾乎為100%;各種細胞耐受度高。

可轉殖長片段基因

我們的E1和E3缺失腺病毒載體最多可以插入8kb的基因,無腸(Gutless)腺病毒載體甚至可容納高達34kb的轉基因。

腺病毒相對穩定

重組腺病毒可在冰箱中存放-20度數周,-80度冰櫃多年。腺病毒的高穩定性,純化後可以長期保存,使其適用於人類基因治療和藥品開發。

 

Adeno-associated virus (AAV)

 

腺相關病毒(AAV)是一種非包裹的單股DNA病毒,大小約為20nm,可以感染分裂細胞和非分裂細胞。AAV不會引起疾病,並只會引起非常輕微的免疫反應。作用機轉經由感染分裂細胞和非分裂細胞,將其基因組整合到宿主細胞的基因組中,並且僅在有輔助病毒(Helper virus)的情況下複製病毒; 最常見的輔助病毒為腺病毒及單純皰疹病毒。

腺相關病毒特性

感染分裂和非分裂細胞

易產出高力價病毒(High Titer Viral production)

體內造成非常輕微的免疫反應

僅在輔助病毒存在時進行複製

 

如何選擇合適的病毒載體

 

 

慢病毒

腺病毒

腺相關病毒

感染效率

~30%

>90%

30~40%

病毒大小

80-130nm

105nm

18-26nm

造成免疫反應

非常低

宿主細胞整合

O

X

X

載體包裝能力

2.5-5.0kb

3.0-8.0kb

2.5kb

高力價病毒生產

10^7~10^8 IFU/mL

10^9 IFU/mL

>10^10IFU/mL

感染多數細胞株

O

O

O

感染分裂及未分裂細胞

O

O

O

蛋白質表達水平

X

O

X

 

 

ACE BioLabs 提供三種病毒載體系統,依您的實驗目的選擇最適合的病毒載體系統。
服務內容: 病毒包裝 Virus Package (Lentivirus/Adenovirus/AAV)

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