Protein Biology

Ni NTA Beads 6FF

  • Catalog Number : PX0002
  • Number : PX0002-s
  • Size:
    Qty :
  • Price : Request Inquiry
  • Download DataSheet Download COA print

General Information

1.產品介紹

Ni NTA Beads 6FF以高度交聯6%瓊脂糖凝膠為基質,可以耐受較苛刻試劑條件外,其耐壓的基質,也可耐受最高0.3 MPa的壓力,該產品更適合用於工業大規模蛋白純化,可在相對較高流速下,對目的蛋白純化。

 

Table 1. Ni NTA Beads 6FF產品性能

基質

高度交聯的6%瓊脂糖微球

載量 (/mL 基質)

>40mg 6XHis-tagged protein

粒徑 (μm)

45-165

最大壓力

0.3 MPa, 3 bar

儲存緩衝液

20%乙醇 1XPBS

儲存溫度

4°C - 30°C

 

 

原因分析

解決方案

柱子反壓過高

填料堵塞

裂解液中含有微小的固體顆粒,建議上柱前使用0.220.45μm濾膜過濾,或離心去除。

樣品太黏稠

樣品中含有高濃度的核酸,加長破碎時間至粘度降低,或添加DNase I (終濃度5 μg/ml),Mg 2+(終濃度1mM),置於冰上10-15分鐘。

沖提組分中沒有目的蛋白

蛋白可能是包涵體,沒有在上清中

可以通過電泳檢測裂解液分析上清中是否含有目的蛋白,包涵體蛋白需要按照包涵體蛋白的純化方式。

表達量太低

優化表達條件。

目的蛋白結合比較弱,在

洗雜步驟被洗下來了

提高wash BufferpH,或者降低咪唑濃度。

目的蛋白結合過強,不容易沖提下來

降低Elution BufferpH值,或者增加Elution Buffer中咪唑濃度。

蛋白降解

菌體破碎時添加蛋白酶抑制劑。在4°C下進行純化操作。

沖提組分不純(含有多種蛋白)

洗雜不徹底

增加Wash Buffer體積。

樣品中含有其他的組氨酸標籤蛋白

透過調整pH值,或者咪唑濃度來優化洗雜條件。再使用其他的純化手段(如離子交換,疏水等)進一步純化沖提組分。

填料呈現褐色

緩衝液中含有DTT等還原劑

請參考表2,適當降低還原劑DTT濃度,或改用巰基乙醇。

上樣過程中蛋白發生沉澱

操作溫度太低

室溫下進行上樣。

蛋白發生聚集

在樣品和緩衝液中添加穩定劑,如0.1%Triton X-100Tween-20

Recently Viewed Products

gotop link
Customized Product Contact Us
0