Peptide Synthesis | 多肽常見問題 2018/09/27

Q1 多肽的溶解性

由於客製化多肽,所能提供的多樣性很大,要溶解多肽是很複雜,需考量胺基酸電荷、親水疏水性、二級結構等因素。建議在確認合適溶劑之前,先使用少量進行溶解測試,確認多肽能完全溶解後,再加入水或適當溶劑稀釋之最終濃度。下列方法判斷多肽的溶解性 :

1. 先確認多肽中電荷情況,判斷多肽酸鹼性 :

負電荷極性胺基酸 (-1)  :  Asp (D), Glu (E), C端 -COOH

正電荷極性胺基酸 (+1) :  Lys (K), Arg(R), His (H), N端-NH2

不帶電非極性胺基酸 (0) :  Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Phe (F), Tyr (Y), Trp (W), Met(M), Pro (P)

例如 :  KWLHRMDAE =(-2  負胺基酸)+(-1 C端) + (+3 正胺基酸)+ (+1 N端) = +1 為鹼性多肽。

           DVYVEHPLIK = (-2 負胺基酸) + (-1 C端) + (+2 正胺基酸) +(+1 N端) = 0 為中性多肽。

           ELDEVEPRVD= (-5 負胺基酸) + (-1 C端) + (+1 正胺基酸) + (+1 N端) = -4 為酸性多肽。           

 

2. 選擇適合溶劑溶解多肽 : 

靜電荷>0,則多肽為鹼性,可先使用滅菌水ddH2O溶解;如溶解度不大,可加入10% 醋酸或 三氟乙酸(TFA),幫助多肽溶解。

靜電荷<0,則多肽為酸性,一樣先使用滅菌水ddH2O溶解,或0.1% NH4OH幫助溶解。

靜電荷=0,則多肽為中性,使用滅菌水ddH2O溶解。

若疏水性胺基酸比例>30%,使用有機溶劑,如 乙 腈(ACN) 、甲醇、異丙醇、二甲基甲醯胺(DMF)或DMSO等幫助溶解。

* 使用DMSO、DMF是透過打開多肽的二級結構幫助溶解,因此如要探討關於對於生物活性相關的研究,不建議使用。

 

Q2 如何選擇多肽純度

ACE Biolabs提供胜肽純度 :從Crude、Desalted、>70%、>75%、>80%、>85%、>90%、>95%、>98% 不同級別供客戶選擇。

而根據客戶的實驗需求,建議純度與應用範圍如下 : 

1. 對於不太靈敏的篩選實驗,使用 Crude ~ >75%。

2. 對於免疫實驗,使用 >85%。

3. 對於蛋白質interaction、蛋白Assay、細胞實驗,使用 >95%。

4. 對於晶體結構,使用> 98%。

 

Q3 多肽的保存

ACE Biolabs 所提供的多肽是冷凍乾燥粉狀,收到後,請立即冷凍-20℃保存,並保持乾燥,盡量維持環境的溼度、溫度。

溶解前,將多肽置於乾燥環境中,回溫至室溫。

溶解後,由於多肽溶液較乾燥粉末穩定性差,因此建議 : 

1. 分裝小包裝,避免反覆解凍。

2. 溶於 pH5-7 無菌溶液中,-20℃保存 。

3. 由於細菌會降解多肽,因此建議分裝前使用0.22 or 0.45 µm 小飛碟過濾,確保無菌 。

4. 多肽中含有Cys、Met;Try、Glu、Asp等胺基酸容易氧化,因此建議減少與氧化劑接觸、避免反覆開蓋。

 

Q4 特殊環肽

ACE Biolabs可提供Cys-Cys 間雙硫鍵結、酯鍵、硫酯鍵等,形成頭尾相接環肽(head-to-tail),側鏈相接環肽(sidechain-to-sidechain)等。

 

 

*如果您有任何想了解多肽的資訊,歡迎與客服人員詢問,我們會隨時更新文章內容! *

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