大腸桿菌表達系統

序列

項  目

實驗內容

工作日

1

表達鑒定
與
可溶性檢測

1. 將質體轉殖到Competent E. coli  後，挑選5個colonies，進行表達測試。以SDS-PAGE確認表達。
2. 選擇表達最佳的colony，進行37^oC與15^oC 可溶性分析測試，2個 IPTG濃度優化。以SDS-PAGE確認可溶性。

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2

表達鑒定與可溶性檢測
+ 1L放大表達純化
交付蛋白樣品＞1mg(蛋白純度80～85%)，以及詳細的實驗報告。

1. 表達鑒定與可溶性檢測後確認目標蛋白表達量及可溶性，才可進行放大表達純化。[若目標蛋白為不可溶的inclusion body,  需額外進行refolding 測試。]
2. 1L菌液培養表達，進行一步親和純化(常用：Ni、MBP、GST)。

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3

放大表達純化

根據上述步驟確認 1 L 菌液的表達純化量，
追加表達純化，以每 L 為單位計算。

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4

提高蛋白純度

進行蛋白純化優化測試，提高純度到90%~95%。

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5

去除融合標籤(Tag)

1. 使用蛋白酶將重組蛋白融合的標籤序列(His-Tag, MBP protein..等)切除。
2. 蛋白純化

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去除內毒素

根據蛋白量計算收費

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