細胞培養大多數都依賴血清培養,血清中含有豐富的營養物質,例如:蛋白質、生長因子、生長激素、胺基酸、維生素、糖、脂質以及微量元素維持細胞生理。體外研究以及生產應用,最常用的是胎牛血清(FBS),優點在於高水平的營養以及含有低水平的抗體,缺點在於FBS供應不穩定,且不同的批次造成細胞培養不穩定的影響,加上成本高及道德疑慮,故使用合適高質量替代產品-Specsure® Bovine Growth Serum並配合Specsure® Medium Supplement  細胞培養添加劑,達到與FBS相仿的細胞培養效果以及生物機制。許多細胞株可直接由FBS換成Specsure® Bovine Growth Serum,不需適應期間,如U2OS, HEK293, CHO, Vero, NB, HeLa, A549 和 MDBK等等。然而,從未嘗試更換血清來源的細胞株,多數研究者不敢貿然更換血清。

ACE BioLabs 不僅是提供您 Specsure® Bovine Growth Serum,也提供您 FBS 更換血清到 Specsure® Bovine Growth Serum 細胞馴化客製化服務,我們將藉由直接法及間接法兩種方式,將您的細胞培養環境由 FBS 更換到  Specsure® Bovine Growth Serum。

ACE BioLabs 已成功完成馴化的細胞株:MCF7、A549、HEK293T、RAW264.7、M210B4 等。

 

馴化步驟

 

直接法 : 直接更換 FBS 血清至 Specsure® Bovine Growth Serum,搭配 Specsure®Medium Supplement 幫助細胞生長適應。

  1. 細胞繼代過程中,將細胞分成兩組,細胞培養於10% FBS培養液為對照組,另一組直接將細胞培養液更換成添加10 % Specsure® Bovine Growth Serum + 0.1% Specsure® Medium Supplement為馴化組。
  2. 依照細胞生長速度,繼代 1-2 次後,細胞培養液更換成添加10 % Specsure® Bovine Growth Serum
  3. 觀察其生長速率以及型態變化。以CCK-8
  4. 馴化完成後,取上清液檢測黴漿菌,並凍存細胞。

 

間接法: 逐步降低 FBS 血清用量並逐漸增加 Specsure® Bovine Growth Serum的用量

  1. 細胞繼代過程中,將細胞分成兩組,細胞培養於10% FBS培養液為對照組,另一組直接將細胞培養液更換成添加 5% FBS + 5 % Specsure® Bovine Growth Serum 為間接馴化組。。
  2. 依照細胞生長速度,繼代細胞2~3代,觀察其數量以及型態變化,待細胞適應其之培養液。
  3. 觀察生長速率及型態變化趨於穩定,更換5% FBS + 5 % Specsure® Bovine Growth Serum 至10 % Specsure® Bovine Growth Serum 的培養液。
  4. 持續繼代細胞2~3代,讓細胞適應對應之培養液。
  5. 觀察生長速率及型態變化,趨於穩定時視為馴化完成。
  6. 馴化完成後,取上清液檢測黴漿菌,並凍存細胞。

 

注意事項:

  • 馴化細胞過程中,直接法馴化細胞的組別,使用 Specsure®Medium Supplement 作為添加劑,幫助細胞生長適應。
  • 間接馴化細胞過程中,若發現細胞生長緩慢,將視情況添加Specsure® Medium Supplement 幫助細胞生長適應。
  • 若在馴化細胞過程中,發現細胞型態改變且無法回復,則判斷該細胞株無法使用Specsure® Bovine Growth Serum。

 

馴化案例 1

A549細胞株

 

 

上圖為A549細胞經由Specsure® BGS間接法馴化成功之細胞,繼代使細胞更適應穩定過後,與FBS種相同的細胞數目,如圖所示細胞型態一致,經由CCK8 cell viability test三天細胞數目變化確認細胞生長速率,比較FBS以及Specsure® BGS兩者,生長速率及存活率皆相似,因此,A549細胞株可以使用Specsure® BGS配合Specsure® Medium Supplement替代FBS培養。

 

細胞馴化 服務流程  細胞馴化服務委託書

流程

項目

內容

接案

  • 了解客戶細胞
  • 簽訂服務委託書
  • 預付40% 訂金與材料費

了解細胞株特性- 細胞生長速率、細胞外觀、細胞培養條件

材料準備

細胞培養條件確認

  1. 檢測客戶提供的 Medium及 FBS
  2. 檢測客戶之細胞黴漿菌汙染情形
  3. 檢測細胞生長速率
  4. 確認培養液更換條件

馴化細胞

細胞培養液更換

  1. 直接法及間接法同時進行。
  2. 觀察生長速率及型態變化
  3. 視情況添加Specsure™ Medium Supplement 幫助細胞生長適應。

出貨前檢測

將馴化完成細胞株培養至出貨規格:

  1. 檢測黴漿菌
  2. 檢測其生長速率。
  1. 檢測細胞黴漿菌汙染
  2. 以CCK-8 檢測馴化細胞株生長速率(與FBS 組比較)

細胞培養至出貨規格

2x106 cell/tube 凍管乙管

隨貨提供

  1. 該細胞株之生長速率分析結果。
  2. 該細胞株之黴漿菌檢測結果

客戶使用檢測

請於一個月內測試細胞,並告知測試結果

  1. 細胞凍管留存3個月

 

 

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