ELISA | 原理介紹 2020/02/12

ELISA | 原理介紹

 

酵素結合免疫吸附分析法,Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) 為實驗室中常用的一種分子生物檢測技術,其原理利用抗體與抗原專一性結合的特性,配合呈色劑反應,利用呈色深淺來定量樣品中特定目標蛋白質的含量。ELISA Kit的優勢在於,只需要少量樣品(100 ul)即可進行檢測、敏感性高並且可以同時檢測多種抗體。

 

依照樣品及抗原抗體鍵結機制,ELISA主要可以分為三種類型:(1)間接法(indirect) (2) 三明治法(sandwich)(3) 競爭法(competitive)。

 

間接法(indirect)

 

間接法為檢測抗體常用的方法,原理將酵素標記在二抗上,檢測與盤上抗體結合的抗體。

  1. 將抗原固著於塑膠孔盤上,洗去未結合抗原及雜質
  2. 加入檢體,使檢體中抗體與固著抗原結合,洗去多餘檢體
  3. 加入標記酵素之二次抗體,使二次抗體與盤中待測檢體結合,洗去未結合二次抗體
  4. 加入酵素受質顯色,藉由吸光值計算待測抗體含量

 

三明治法(sandwich)

 

三明治法為檢測大分子抗原常用的方法,原理利用兩種抗體對檢體中抗原進行兩次專一性辨認。

  1. 將抗體固著於塑膠孔盤上,洗去未結合抗體及雜質
  2. 加入檢體,使檢體中抗原與固著抗體結合,洗去多餘檢體
  3. 加入另一對抗原專一之一次抗體,使檢體中抗原與此抗體結合,洗去未結合抗體
  4. 加入標記酵素之二次抗體,使二次抗體與一次抗體結合,洗去未結合二次抗體
  5. 加入酵素受質顯色,藉由吸光值計算待測抗原含量

 

三明治法以兩種抗體對檢體中抗原進行兩次專一性辨認,因此專一性非常高,但此待測抗原必須是多價抗原,才能與兩種以上專一性抗體結合;且此方法需要足夠的表位空間以進行抗原抗體的夾心,因此不適用於半抗原或小分子抗原等分子量較小之待測物。

 

 

競爭法(competitive)

 

半抗原或小分子抗原等分子量較小之待測物可以採用競爭法進行檢測。競爭法為檢測小分子抗原常用的方法,原理利用樣品抗原和標記酵素抗原互相競爭固著抗體結合位。

  1. 將抗體固著於塑膠孔盤上,洗去未結合抗體及雜質
  2. 加入檢體,使檢體中抗原與固著抗體結合
  3. 加入標記酵素抗原,此抗原也可與固著抗體結合,由於固著抗體數量有限,因此檢體中抗原量越多,標記酵素抗原可結合的固著抗體位點越少,加入另一對抗原專一之一次抗體,使檢體中抗原與此抗體結合,洗去未結合抗體
  4. 洗去多餘抗原,加入酵素受質顯色,藉由吸光值計算待測抗原含量。當檢體中抗原量越多,代表帶有酵素的抗原越少,顯色也越淺。

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