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Transfection  |優化細胞轉染方法 2020/05/06

Transfection  |優化細胞轉染方法

 

 

細胞轉染是將外源基因導入細胞內的一種技術,將DNA,RNA等導入真核細胞內的技術,於分子細胞生物學研究控制真核細胞重要工具,研究基因功能,基因表達以及蛋白質生產等,應用越來越廣泛。

 

每一個實驗室,會有不同的實驗步驟以及方法,成功的細胞轉染,取決於許多的因素,不論是轉染的方法、細胞株健康程度、細胞株培養代數、細胞培養的密度、轉染質體的品質及比率、轉染實驗時培養基使用等因素,都會影響實驗的結果已及細胞的存活率;然而,追求高效轉染細胞的同時,轉染方法造成細胞死亡也是需要考慮的重要環節,以下提供一些可能因素及著手優化轉染方法。

  1. 使用健康的細胞株:

使用健康並且適合轉染的細胞株,能改善轉染效率,使用代數較低的細胞,於50~90%密度貼附情況下,具有最活躍的生長分化效率,較容易接收外來質體,代數高的細胞株,繼代的過程當中細胞株會有形態的改變、不同的生長速率、減少蛋白產生量以及容易受到刺激,使用初代細胞株更能夠模擬原始組織生長情形,但初代細胞株具有一定限度的生長以及壽命;轉染過程使用相同的細胞量,確認不同轉染試劑於相同條件下的效率,另外,監測並確認細胞是否有黴漿菌汙染,汙染的細胞會降低轉染效率,過度繼代細胞會影響基因表達以及細胞轉染。

  1. 細胞培養的條件

細胞培養的過程使用的培養基及培養基,會影響轉染的效率,每一株細胞需要參考細胞來源使用的材料來進行實驗,才能夠獲得最好的轉染效率;有些脂質體包覆轉染方式容易受到血清影響,降低與細胞膜之間的作用,降低轉染效率,轉染過程中,培養基含有抗生素也會影響轉染效率。

  1. 使用高品質的質體轉染:

高效轉染的質體,應避免RNA以及其它化學物的汙染,質體準備濃度應落在0.2-1.0mg/mL,A260/A280 比率適合落在1.7-1.9之間。

  1. 優化轉染質體使用量

不同的轉染試劑,應使用不同量的質體,使用較多的質體並不會造成較高的轉染效率,反倒產生較高的細胞毒性,轉染初代(Primary)細胞,可降低質體濃度造成的細胞毒性;此外,優化轉染試劑以及質體使用不同比率(µL: µg),須於不同細胞株優化最佳轉染效率,如果轉染質體具有報導基因,可經由螢光顯微鏡估算細胞轉染效率,或是使用流式細胞儀,精確偵測螢光比率分析。

  1. 細胞存活率

細胞轉染試劑及材料在進行實驗之前,於每種細胞須測試試劑對細胞產生的毒性,可以經由CCK-8或是MTT等assay作為依據,最終的目標能達成具有高的細胞存活率以及轉染效率,質體及細胞如果具有內毒素及其他汙染,會降低細胞轉染效率,製備高品質質體及監測細胞汙染,可以改善此狀況。

 

我們的服務及產品

ACE Biolabs提供一系列的轉染優化服務及產品,包含慢病毒包裝質體,以及DNA質體萃取試劑組、細胞培養培養基Specsure BGS細胞培養添加劑Specsure,高效轉染細胞株(293T/A549)、高效轉染試劑(ACExFECT2000)、抗生素等等細胞轉染相關服務,歡迎來到我們的官網以及相關產品洽詢。

細胞相關服務: https://www.acebiolab.com/TW/Page/67

細胞培養產品: https://www.acebiolab.com/TW/prodlist/cate/1/5?type=5

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