Western-blotting | Loading control指南 2019/11/27

Western-blotting | Loading control指南

 

Western Blot,常用於分析目標蛋白質的實驗方法,其原理利用電泳分離細胞蛋白質,將蛋白質透過電壓使得蛋白質移動到轉印膜上,利用抗體與蛋白質專一性結合的特質,來偵測特定蛋白質的表現情況。除了偵測樣品中是否含有目標蛋白外,在實驗中也需要比較不同條件下,目標蛋白表達量的差異。因此,需要Loading control (1)證明上樣量的一致 (2)確保蛋白質完整轉印至轉印膜上,並作為normalization之依據。

 

在選擇 Loading control 時,需要注意

(1) loading control分子量需要與目標蛋白分子量有所區隔

ACE Biolabs 提供您從 13-118 kDa,多種分子量抗體供您選擇。

-> 目標蛋白質分子量較大時,推薦使用 vinculin 作為Loading control。

 

(2) 了解實驗原理目的與樣品組成,選擇適當的 Loading control

例如 :

->不同組織的細胞結構會有差異,因此在比較不同組織時,應避免使用Actin及Tubulin等結構蛋白。

->細胞在生長及和胞外基質作用時,會改變actin生成,因此樣品為骨骼肌細胞時不適合選用 actin 為 Loading control。

-> 在沒有核膜的樣品中,避免選用 Lamin, PNCA, TBP為 Loading control 。

 

ACE Biolabs Loading controls :

 

Sample type

Catalog No.

Antibody name

MW (kDa)

Whole cell

A20980PI

Vinculin

118

A33260PI

Beta-actin

43

A20246PI

GAPDH

36

A240014

Cyclophilin A

18

A20266PI

Alpha-Tubulin

52            

A20394PI

Beta-tubulin

55

Mitochondrial

A21088PI

HSP60

60

A21297PI

COXIV

20

A22559PI

Cytochrome c oxidase

16

Nuclear

A20295PI

Lamin A

66

A20256PI

Lamin B

66

A20861PI

PCNA

36

A23332PI

TBP

38

A20248PI

Histone H3

13

Membrane

A20777PI

Na+/K+ ATPase

110

Serum

A21085PI

Transferrin

75

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