Western Blotting │ 蛋白質定量方法比較 BCA vs Bradford 2020/05/27

Western Blotting │ 蛋白質定量方法比較 BCA vs Bradford

 

BCA相較Bradford進行蛋白質定量,其靈敏度具有很大的差異性,以下就以ACE Biolabs的實驗結果進行說明:

 

Bradford Assay原理

        Bradford的測定法是利用Coomassie blue結合蛋白質的能力,使試劑由紅棕色轉變為藍色,利用ELISA Rader測定595 nm的吸光度,帶入standard curve就可以知道樣品濃度。

 

BCA Assay原理

    BCA測定法是以傳統的Lowry assay為基礎而發展的,利用銅離子與蛋白質在鹼性條件下反應,會由綠色變為紫色,用ELISA Rader測定562 nm的吸光度,帶入standard curve就可以知道樣品濃度。

 

BCA Assay/Braford Assay比一比

 

BCA Assay (A1035)

Bradford Assay (A1034)

洗滌劑/buffer

不會干擾

會被部分種類干擾

適用蛋白質濃度檢測區間

5-2000 μg/mL

1-125 μg/mL

時間

30 min

1-5 min

吸光值

562 nm

595 nm

反應所需的sample/well

25 μL

20 μL

Buffer限制

兼容大部分buffer

避免非離子型去污劑 (Ex: TritonNP-40),對精氨酸和賴氨酸等鹼性和芳香族氨基酸高度敏感;對酸性buffer相容性差

試劑保存

室溫,24個月

4˚C12個月

 

 

 

Standard Curve

 

 

 

    由三條standard curve的R2值可以看出,standard curve涵蓋的蛋白濃度範圍若愈大,bradford assay的準確度愈低(R2值愈小),Bradford的檢測區間建議在0-125 μg/mL,由實驗結果可以證實,BCA assay是靈敏度較高、較穩定的蛋白質濃度檢測試劑。

 

ACE Biolabs 蛋白質定量相關產品

Bradford protein assay (5X)

A1034

500 mL

BCA Protein Assay Kit

A1035

500 mL

 

 

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